【目的】應用RNA干擾技術同時抑制大豆脂肪氧化酶(Lox)和胰蛋白酶抑制劑(KTi)基因的表達,改良大豆品質,培育缺失Lox和KTi的大豆新材料?！痉椒ā繎肦NAi原理,以雙價RNAi植物表達載體pCAM-BIA1301-KtiRi-LoxRi為基礎,以植物表達載體pCAMBIA3301的質粒DNA為模板,利用CaMV35S啟動子的上游引物和CaMV35S終止子的下游引物,PCR擴增含有除草劑抗性基因bar的整個表達原件,然后將其插入到pCAM-BIA1301-KtiRi-LoxRi中,構建以除草劑為篩選標記的雙價RNAi表達載體,并通過花粉管通道法轉化至大豆吉農18、吉農28和吉農27 3個品種中,對轉基因植株進行PCR、Southern雜交、RT-PCR分子水平檢測和除草劑抗性檢測?！窘Y果】質粒PCR和酶切鑒定以及測序結果表明,雙價RNAi植物表達載體pCAMBIA1301-KtiRi-LoxRi-bar構建成功。將其轉入到大豆中,分別獲得吉農18、吉農28、吉農27T1代籽粒47,25和86粒,以及T2代轉基因植株50株。RT-PCR結果表明,轉基因株系中脂肪氧化酶和胰蛋白酶抑制劑mRNA積累受到明顯抑制?！窘Y論】獲得了轉pCAMBIA1301-KtiRi-LoxRi-bar的T2代轉基因大豆。 （共6頁)

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網址: 大豆胰蛋白酶抑制劑和脂肪氧化酶基因雙價RNAi表達載體的改造及轉化 http://www.gysdgmq.cn/newsview343086.html