2022年美國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)（ASCO）年會(huì)將于2022年6月3日~7日在美國(guó)伊利諾伊州芝加哥以線上+線下的會(huì)議形式舉行。

會(huì)議上，復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院樊嘉院士、周儉教授等領(lǐng)銜的研究團(tuán)隊(duì)與鹍遠(yuǎn)生物共同報(bào)道了一種基于血液ctDNA甲基化信號(hào)的肝癌早診方法-HepaAiQ?（大會(huì)摘要號(hào)：Abstract：4103）[1]。

研究結(jié)果顯示：HepaAiQ?檢測(cè)性能優(yōu)異，在健康人群中的特異性為93.4%、肝癌診斷的靈敏度高達(dá)87.2%，尤其對(duì)于早期肝癌也顯示出優(yōu)異診斷性能（靈敏度為83.2%）。

此外，由于HepaAiQ?基于更敏感和經(jīng)濟(jì)的qPCR檢測(cè)平臺(tái)，覆蓋人群廣泛，有望為眾多肝癌高危人群帶來(lái)更為精準(zhǔn)的診斷。

肝細(xì)胞癌（Hepatocellular carcinoma, HCC）是肝癌的主要組織學(xué)亞型，占原發(fā)性肝癌的90%，是全世界常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，也是慢性肝病患者最常見(jiàn)的死亡原因。

我國(guó)是肝癌高發(fā)大國(guó)，在惡性腫瘤中肝癌的發(fā)病率位居前四，死亡率位居第二，僅次于肺癌[2]。根據(jù)國(guó)家癌癥中心發(fā)布的最新一期全國(guó)癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示：2016年我國(guó)肝癌新發(fā)病例和死亡病例分別約為38.9萬(wàn)例和33.6萬(wàn)例[2]。

由于HCC起病隱匿，早期很少出現(xiàn)特殊或明顯的癥狀，70%-80％HCC患者一旦確診即為中晚期，病程短，預(yù)后差，5年生存率僅約為14.1%[ 3]。如果能夠盡早發(fā)現(xiàn)，患者將可以得到更有效的手術(shù)治療，據(jù)統(tǒng)計(jì)早期HCC的5年生存率可高達(dá)90%[3,4]。因此，對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)人群實(shí)施早期篩查，可實(shí)現(xiàn)早期診斷和早期治療，從而達(dá)到長(zhǎng)期生存。  目前，HCC仍缺乏有效的早期篩查手段，傳統(tǒng)手段的檢測(cè)性能和可及性制約了臨床篩查的有效實(shí)施。 目前HCC篩查方式主要包括血液學(xué)AFP（甲胎蛋白）檢測(cè)和影像學(xué)檢查。 從目前診療路徑來(lái)看[3,5]，HCC早篩通常聯(lián)合AFP和肝臟超聲（US）對(duì)HCC高危人群進(jìn)行定期篩查，發(fā)現(xiàn)異常再進(jìn)一步考慮CT或者核磁共振檢查。

甲胎蛋白（AFP）是目前診斷HCC應(yīng)用最多的血清學(xué)標(biāo)志物，但仍有近40%HCC患者AFP持續(xù)在正?；蜉^低水平，而且妊娠、活動(dòng)性肝炎、生殖系統(tǒng)腫瘤、胃腸胰腺等其他消化道腫瘤等人群血清AFP也會(huì)升高[6]。

超聲（US）設(shè)備簡(jiǎn)單，價(jià)格低容易開(kāi)展，在臨床上廣泛應(yīng)用，但其對(duì)早期HCC診斷靈敏度僅47%[7]，且受肝硬化結(jié)節(jié)干擾，對(duì)操作者經(jīng)驗(yàn)要求較高。

即使應(yīng)用AFP和超聲聯(lián)合檢測(cè)，對(duì)早期HCC的靈敏度也僅有63%[7]，仍然無(wú)法滿足早期HCC篩查的需求。

CT平掃對(duì)于極早期HCC（<1 cm）或密度近似正常肝實(shí)質(zhì)的HCC難以顯示，且具有一定的放射性[8-10]。

MRI雖然性能較超聲（US）和CT較大提升，但檢測(cè)的靈敏度和特異性也存在一定的天花板[10]，且我國(guó)人口基數(shù)大、經(jīng)濟(jì)水平不足，將其作為常規(guī)篩查手段也不大現(xiàn)實(shí)。

因此，我國(guó)迫切需要開(kāi)發(fā)一種適用于廣泛人群的有效、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用的HCC早期手段?；诖?， 本研究開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證了一種無(wú)創(chuàng)經(jīng)濟(jì)的血液ctDNA甲基化檢測(cè)方法，實(shí)現(xiàn)高危人群的早期預(yù)警。

一、研究方法

圖1. 研究設(shè)計(jì)

研究人員通過(guò)MONOD?技術(shù)對(duì)組織樣本進(jìn)行全基因組簡(jiǎn)化甲基化測(cè)序（Reduced Representation Bisulfite Sequencing，RRBS），初步遴選出HCC特異性相關(guān)的甲基化標(biāo)志物。通過(guò)mTitan?靶向甲基化測(cè)序技術(shù)對(duì)血漿樣本驗(yàn)證，靶點(diǎn)同步進(jìn)行文獻(xiàn)檢索和功能富集，進(jìn)一步優(yōu)化HCC特異性相關(guān)的高性能標(biāo)志物。

研究甄選出最優(yōu)的甲基化標(biāo)志物若干，再通過(guò)大量臨床血漿樣本構(gòu)建HCC多基因甲基化血液檢測(cè)模型-HepeAiQ?，并對(duì)HepeAiQ?模型進(jìn)行盲法驗(yàn)證，測(cè)試模型的普適性和穩(wěn)定程度。

二、研究結(jié)果

1. HCC特異性甲基化標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)和優(yōu)化

本研究利用MONOD?對(duì)37個(gè)HCC組織、26個(gè)正常組織、20個(gè)白細(xì)胞和114個(gè)空白對(duì)照（血漿）進(jìn)行RRBS，遴選出數(shù)百個(gè)HCC特異性相關(guān)的甲基化標(biāo)志物（圖2），并以5個(gè)有代表性的標(biāo)志物為例評(píng)估其對(duì)HCC的檢測(cè)性能，發(fā)現(xiàn)其在HCC甲基化程度顯著高于其他樣本（圖3）。 圖2. HCC特異性甲基化標(biāo)志物熱圖 圖3. 甲基化標(biāo)志物鑒別HCC的性能評(píng)估

2. NGS血檢模型性能優(yōu)異，AUC可達(dá)0.98以上

研究者對(duì)276個(gè)HCC和393個(gè)空白對(duì)照（血漿）進(jìn)行mTitan?靶向甲基化測(cè)序，結(jié)果顯示該模型性能相當(dāng)優(yōu)異，其平均AUC為0.985（圖4）。  

圖4. HCC特異性甲基化標(biāo)志物NGS panel性能表現(xiàn)

  3. 多重PCR檢測(cè)HepaAiQ?模型建立及驗(yàn)證 考慮到簡(jiǎn)化多重qPCR檢測(cè)方法在臨床上的適用性，研究者進(jìn)一步使用559個(gè)血漿樣本，包括293個(gè)HCC樣本、60個(gè)肝硬化樣本（LC）、36個(gè)慢性乙型肝炎樣本（CHB）和170個(gè)健康對(duì)照樣本（CTRL），對(duì)HCC靶點(diǎn)做進(jìn)一步甄選優(yōu)化，建立多重PCR檢測(cè)方法（HepaAiQ?）。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HepaAiQ?檢測(cè)在LC、CHB和CTRL的特異性分別為88.3%、91.7%和92.4%的情況下，HCC靈敏度可達(dá)85.3%。緊接著，HepaAiQ?模型對(duì)來(lái)自多中心的374份血漿樣本進(jìn)一步盲法驗(yàn)證，證實(shí)其對(duì)HCC的敏感性為87.2%，對(duì)LC、CHB和CTRL的特異性分別為86.8%、90.5%和93.4%（表2）。 

表2. 驗(yàn)證試驗(yàn)中HepaAiQ?的性能表現(xiàn)

4. 相比AFP篩查方法，HepaAiQ?具有顯著優(yōu)越性

研究者將HepaAiQ?與HCC傳統(tǒng)篩查方法AFP方法進(jìn)行了比較。結(jié)果顯示，HepaAiQ?在各個(gè)分期中的表現(xiàn)均優(yōu)于AFP（87.0% vs. 56.2%），尤其是在早期HCC中（83.2% vs. 48.5%）（圖5）。  

圖5. HepaAiQ?與AFP在HCC診斷中的表現(xiàn)

該研究開(kāi)發(fā)了一種基于血液ctDNA甲基化信號(hào)的HCC早檢方法---HepaAiQ?。HepaAiQ?檢測(cè)性能優(yōu)異，尤其對(duì)于早期HCC具有良好的靈敏度和特異性，可實(shí)現(xiàn)早期HCC的精準(zhǔn)檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)：

[1] Xinrong Yang, Yingchao Wang, De-Zhen Guo,et al. Discovery and clinical validation of cost-effective non-invasive early detection of hepatocellular carcinoma (HCC) through circulating tumor DNA (ctDNA) methylation signature 2022 ASCO Annual meeting. Abstract #4103.

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文章來(lái)源：《國(guó)際肝病》編輯部

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